ก่อนการทดลอง รีเอเจนต์และตัวอย่างทั้งหมดควรสมดุลกับอุณหภูมิห้อง หลังจากการหลอมใหม่ ควรปั่นแยกตัวอย่างอีกครั้งและนำส่วนลอยไปทดสอบ สำหรับสารทำปฏิกิริยาหรือการเตรียมตัวอย่าง ให้ผสมและหลีกเลี่ยงการเกิดฟอง แนะนำให้ใช้การสอบเทียบและตัวอย่างสำหรับการทดสอบซ้ำ

1. เพิ่ม ple: เพิ่มโซลูชันการทำงานมาตรฐานในสองหลุมแรกตามลำดับ และเพิ่มสองหลุมสำหรับแต่ละความเข้มข้นของโซลูชันการทำงาน 100 μ L ของแต่ละหลุม ตัวอย่างที่จะทดสอบเพิ่มไปยังหลุมอื่นๆ 100 μ L ต่อหลุม (สำหรับความเข้มข้นของตัวอย่างที่สูงกว่าช่วงทดสอบ ให้เจือจางตัวอย่างด้วยสารมาตรฐานและสารเจือจางตัวอย่าง) ไมโครเพลทเคลือบฟิล์มและบ่มที่ 37 ℃ เป็นเวลา 90 นาที เคล็ดลับ: เมื่อเติมตัวอย่างที่ด้านล่างของไมโครเพลท พยายามอย่าสัมผัสผนังรู เขย่าเบาๆ และผสม เพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดฟอง ควรควบคุมเวลาเพิ่มเติมภายใน 10 นาที

2. แอนติบอดี/แอนติเจนที่เติมด้วยไบโอทินิเลต: ทิ้งของเหลวและเขย่าให้แห้งโดยไม่ต้องล้างน้ำ 100 ไมโครลิตรของสารละลายการทำงานของแอนติบอดี/แอนติเจนที่เติมด้วยไบโอทินิเลตถูกเติมลงในแต่ละหลุมทันที ผสม ไมโครเพลทและฟิล์มเคลือบ และบ่มที่อุณหภูมิ 37 ℃ เป็นเวลา 1 ชั่วโมง

3. การล้าง: เขย่าของเหลวในรู เติมน้ำยาล้าง 350 μL ลงในแต่ละหลุม แช่ไว้ 1-2 นาที ดูดหรือเขย่าของเหลวในไมโครเพลท และซับให้แห้งบนกระดาษซับหนา ทำซ้ำขั้นตอนการล้างจานนี้ 3 ครั้ง เคล็ดลับ: เครื่องซักผ้าสามารถใช้ได้ที่นี่และในขั้นตอนการซักอื่นๆ การซักแต่ละขั้นตอนมีความสำคัญต่อการทดลอง

4. คอนจูเกตเอนไซม์ HRP: 100 μ L ของสารละลายเอนไซม์คอนจูเกตต่อหลุม ผสม เคลือบด้วยฟิล์ม และบ่มที่ 37 ℃ เป็นเวลา 30 นาที

5. การล้าง: เทของเหลวลงในบ่อและล้างจาน 5 ครั้งด้วยวิธีเดียวกับขั้นตอนที่ 3

6. ซับสเตรต: เติมสารละลายซับสเตรต (TMB) 90 μL ลงในแต่ละหลุม ผสมให้เข้ากัน เพิ่มฟิล์มเคลือบ และบ่มที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลาประมาณ 15 นาที หมายเหตุ: เวลาบ่มควรสั้นลงหรือยาวขึ้นตามสถานการณ์การพัฒนาสีจริง แต่ไม่เกิน 30 นาที สามารถยุติได้เมื่อมีการไล่ระดับสีที่ชัดเจนในรูมาตรฐาน

7. การสิ้นสุด: เพิ่ม 50 μ L ของสารละลายสำหรับแต่ละหลุมเพื่อยุติปฏิกิริยา หมายเหตุ: ลำดับการเพิ่มเติมของโซลูชันการสิ้นสุดควรเหมือนกับลำดับของโซลูชันวัสดุพิมพ์

8. อ่าน: วัดความหนาแน่นของแสง (OD) ของแต่ละหลุมทันทีที่ 450 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท ควรเปิดเครื่องอ่านไมโครเพลทล่วงหน้าเพื่อตั้งค่าขั้นตอนการทดสอบ

9. หลังการทดลอง ใส่รีเอเจนต์ที่ไม่ได้ใช้กลับเข้าไปในตู้เย็นตามอุณหภูมิการเก็บรักษาที่กำหนดจนถึงอายุการเก็บรักษา