ข่าว

บ้าน / ข่าว / ขั้นตอนโดยละเอียดของการปั่นแยกสำหรับการสกัดไซโตพลาสซึมและโปรตีนนิวเคลียสโดยเครื่องหมุนเหวี่ยงเยือกแข็งความเร็วต่ำแบบตั้งโต๊ะ

ขั้นตอนโดยละเอียดของการปั่นแยกสำหรับการสกัดไซโตพลาสซึมและโปรตีนนิวเคลียสโดยเครื่องหมุนเหวี่ยงเยือกแข็งความเร็วต่ำแบบตั้งโต๊ะ

โพสโดย ผู้ดูแลระบบ | 23 Mar
เครื่องหมุนเหวี่ยงแช่แข็งความเร็วต่ำแบบตั้งโต๊ะใช้ในห้องปฏิบัติการสำหรับการแยกและการสกัดเบื้องต้นของโมเลกุลขนาดใหญ่ทางชีวภาพ ตะกอน ฯลฯ หัวหมุนส่วนใหญ่ทำจากอะลูมิเนียมอัลลอยด์ ซึ่งเป็นแบบแบนและแบบมุม ท่อหอยโข่งทำจากแก้วแข็ง พลาสติกแข็งโพลีเอทิลีน และท่อสแตนเลส เครื่องหมุนเหวี่ยงติดตั้งมอเตอร์ขับเคลื่อน ตัวจับเวลา ตัวควบคุม (ตัวบ่งชี้ความเร็ว) และระบบทำความเย็น (ช่วงอุณหภูมิที่ปรับได้คือ - 20~ 40 ℃) ซึ่งสามารถแทนที่หัวหมุนด้วยความจุที่แตกต่างกันและความเร็วในการหมุนประเภทต่างๆ ตาม ตามความต้องการของวัสดุแรงเหวี่ยง
ขั้นตอนโดยละเอียดของการปั่นแยกสำหรับการสกัดไซโตพลาสซึมและโปรตีนนิวเคลียสโดยเครื่องหมุนเหวี่ยงเยือกแข็งความเร็วต่ำแบบตั้งโต๊ะ:
1. กำหนดสถานะการเติบโตของเซลล์ สถานะการเจริญเติบโตของเซลล์ควรเป็น 80% หรือดีกว่า:
2. หมุนเหวี่ยงที่ 1,500 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 นาที
3. ทิ้งส่วนเหนือตะกอน ล้างเซลล์ด้วย PBS เย็นในปริมาตรที่เท่ากัน ทำซ้ำ 3 ครั้งตามขั้นตอนที่ 2
4. ตามปริมาณฝนโดยประมาณ ให้เพิ่ม 5 เท่าของปริมาตรของ isotonicly sisbuffer ลงในอนุภาคของเซลล์เพื่อให้เซลล์แขวนลอยอย่างนุ่มนวลและหลีกเลี่ยงโฟมเท่าที่จะทำได้
5. เติม lysisbuffer ลงในเซลล์ที่แขวนลอยแล้วนำไปแช่บนน้ำแข็งเป็นเวลา 15 นาที เพื่อให้เซลล์ขยายตัว ซึ่งสามารถตรวจสอบได้ด้วยกล้องจุลทรรศน์
6. สำหรับเซลล์ที่ขยายในการทดลองเซลล์ ให้เติม IGEPALCA-630 10% เพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายถึง 0.3% ผสมให้เข้ากันแล้วเติมอย่างเบามือ
7. ปั่นแยกทันที (ใช้หลอด EP ขนาด 1.5 มล. ที่ 5500r/นาที เป็นเวลา 30 วินาที สำหรับปริมาณมาก ใช้หลอดขนาด 50ml ที่ 5500r/นาที เป็นเวลา 2 นาที สำหรับปริมาณมาก)
8. ย้าย supernatant (โปรตีนไซโตพลาสซึม) ไปยังท่อแช่แข็งใหม่
9. แขวนลอยเซลล์ด้วยปริมาตร 5 เท่าของอนุภาคแขวนลอยใน isotoniclysbuffer แล้วผสมให้เข้ากัน
10. ปั่นแยกสารแขวนลอยของเซลล์ที่ 1,500 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 นาที แล้วนำส่วนที่เกินออก
11. ระงับอนุภาคด้วยปริมาตร 2/3 เท่าของสารสกัดบัฟเฟอร์
12. วางท่อบนเครื่องผสมแบบสั่น เขย่าและผสมที่ 700r/min เป็นเวลา 15 min จากนั้นที่ 1400r/min เป็นเวลา 15 min กระบวนการทั้งหมดควรระมัดระวังเพื่อหลีกเลี่ยงโฟม
13. ปั่นแยกที่ 9400r/min เป็นเวลา 15 นาที ย้ายส่วนลอยไปยังหลอดปั่นแยกแช่แข็งใหม่หลังจากการปั่นแยกที่อุณหภูมิต่ำ
14.แบ่งออกเป็นหลายส่วนและแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ (การเก็บรักษาระยะยาวควรอยู่ที่ - 80 ℃ การเก็บรักษาระยะสั้นควรอยู่ที่ - 20 ℃)
\

Contact Us

*We respect your confidentiality and all information are protected.