ร อีโคเวอรี่

1. ถอดท่อแช่แข็งออกจากไนโตรเจนเหลวและใส่ลงในอ่างน้ำที่มีอุณหภูมิ 37°C ทันที เขย่าเล็กน้อย หลังจากของเหลวละลาย (ประมาณ 1-1.5 นาที) ให้นำแอลกอฮอล์ออกมาและวางไว้บนโต๊ะทำงานที่สะอาดเป็นพิเศษ

2. นำเซลล์แขวนลอยไปใส่ในหลอดปั่นแยกขนาด 15 มล. พร้อมสื่อ 10 มล. (ล้างหลอดแช่แข็งด้วยสื่อกลางและล้างเซลล์ทั้งหมดที่ติดอยู่กับผนัง) แล้วปั่นแยกที่ 1,000 เป็นเวลา 5 นาที

3. ส่วนเหนือตะกอนถูกกลับด้านและเติมตัวกลาง 1 มล. เพื่อระงับเซลล์ รมควันลงในจานขนาด 10 ซม. ที่มีสื่อ 10 มล. แล้วเขย่าซ้ายและขวาเบา ๆ เพื่อให้เซลล์ในจานกระจายอย่างสม่ำเสมอ

4. ทำเครื่องหมายประเภทและวันที่ของเซลล์ ชื่อมนุษย์ และอื่นๆ ใส่ไว้ในตู้อบ CO2 ติดเซลล์และเปลี่ยนสื่อ

5. สื่อถูกเปลี่ยนทุกๆ 3 วัน

พี ตูด

1. พืชถูกส่งไปถึงความครอบคลุม 80-90%

2. อับสื่อต้นฉบับ .

3. เพิ่มทริปซินที่เหมาะสม (เพียงแค่ปิดเซลล์) และย่อยเป็นเวลา 1-2 นาที .

4. การย่อยอาหารถูกยุติโดยการเพิ่มตัวกลางที่มีซีรั่มในปริมาตรที่เท่ากัน .

5. เป่าเซลล์ด้วยปืนปิเปตและปล่อยทิ้งไว้ทั้งหมด

6. เซลล์ถูกดูดเข้าไปในหลอดปั่นแยกขนาด 15 มล. และปั่นแยกที่ 1,000 เป็นเวลา 5 นาที

7. เทส่วนเหนือตะกอนและเติมสื่อ 1-2 มล. เพื่อให้เซลล์ทั้งหมดระเบิดขึ้น

8. เซลล์ถูกส่งต่อไปยังจานเพาะเลี้ยงหลายจานขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์ โดยทั่วไปเซลล์มะเร็งจะแบ่งออกเป็น 5 เซลล์ และเซลล์ปกติ 3 เซลล์จะถูกส่งผ่าน ปลูกต่อไป.

อิสระในการย่อยเซลล์และปั่นแยกเซลล์ (ibid. above)

ระงับเซลล์ด้วยสารละลายจัดเก็บแช่แข็งที่เข้ากัน แบ่งเซลล์ลงในท่อแช่แข็งที่ผ่านการฆ่าเชื้อ พักสักครู่ และระบุประเภทเซลล์และวันที่เก็บแช่แข็ง 4℃ 30 นาที, -20℃ 30 นาที, -80℃ ข้ามคืน และ แล้วเก็บไว้ในไนโตรเจนเหลว

การเตรียมสารละลายแช่แข็ง: 70% ปานกลาง 20% FBS 10% DMSO ควรเพิ่ม DMSO อย่างช้าๆ และเขย่าอย่างต่อเนื่อง